NOSIP
Protein u interakciji s dušik-monoksid sintazom je enzim koji je kod ljudi kodiran genom NOSIP.[5][6][7]
Kloniranje i ekspresija[uredi | uredi izvor]
Korištenjem domena oksigenaze ljudskog ENOS (NOS3) kao mamca na 2-hibridnom ekranu kvasca u biblootetici posteljične cDNK, Dedio et al. (2001) klonirali su NOSIP. Izvedeni protein od 301 aminokiseline ima izračunatu molekulskuu masu od 34 kD. NOSIP dijeli 46% i 29% aminokiselinskih identiteta sa ortolozima C. elegans i A. thaliana. Northern blot analizom otkriven je 1,2 kb NOSIP-ov transkript koji je bio izrazito eksprimiran u ljudskom srcu i mozgu, s nižim nivoima u plućima i skeletnim mišićima. U bubrezima, jetri, gušterači i slezeni nije otkrivena bilo kakva ekspresija. Imunohistokemijska analiza pacovskovg srca otkrila je obilnu ekspresiju Nosipa u endotelnim ćelijama srčane mikrovaskulature. Western blot analiza ljudskih vaskulsdkih endotelnih ćelija pokazala je NOSIP pri prividnoj molekulskoj masi od 34 kD.
Aminokiselinska sekvenca[uredi | uredi izvor]
- Simboli
C: Cistein
D: Asparaginska kiselina
E: Glutaminska kiselina
F: Fenilalanin
G: Glicin
H: Histidin
I: Izoleucin
K: Lizin
L: Leucin
M: Metionin
N: Asparagin
P: Prolin
Q: Glutamin
R: Arginin
S: Serin
T: Treonin
V: Valin
W: Triptofan
Y: Tirozin
10 | 20 | 30 | 40 | 50 | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
MTRHGKNCTA | GAVYTYHEKK | KDTAASGYGT | QNIRLSRDAV | KDFDCCCLSL | ||||
QPCHDPVVTP | DGYLYEREAI | LEYILHQKKE | IARQMKAYEK | QRGTRREEQK | ||||
ELQRAASQDH | VRGFLEKESA | IVSRPLNPFT | AKALSGTSPD | DVQPGPSVGP | ||||
PSKDKDKVLP | SFWIPSLTPE | AKATKLEKPS | RTVTCPMSGK | PLRMSDLTPV | ||||
HFTPLDSSVD | RVGLITRSER | YVCAVTRDSL | SNATPCAVLR | PSGAVVTLEC | ||||
VEKLIRKDMV | DPVTGDKLTD | RDIIVLQRGG | TGFAGSGVKL | QAEKSRPVMQ | ||||
A |
Funkcija gena[uredi | uredi izvor]
Koristeći uzajamnu koimunoprecipitaciju i Western blot analizu, Dedio i et al. (2001) potvrdili su interakciju između ENOS i NOSIP u kotransficiranim COS-7 ćelijama. Delecijska analiza pokazala je da je NOSIP vezao C-terminalni dio domena ENOS-oksigenaze u regiji koja se preklapala sa mjestom vezanja za kaveolin plazmamembrane. Prekomerna ekspresija NOSIP-a smanjila je proizvodnju dušik-oksida stimuliranu kalcijem u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO) koje eksprimiraju ENOS. Prekomerna ekspresija NOSIP-a također je smanjila lokalizaciju ENOS-a u membrani ćelija CHO, uzrokujući prelazak sa frakcija membrane bogatih kaveolinom u unutarćelijske odjeljke. Dedio et al. (2001) zaključili su da NOSIP promovira translokaciju ENOS-a iz plazemamembrane na unutarćelijska mjesta, čime inhibira sintezu dušik-oksida. Koristeći afinitetnu hromatografiju i masenu spektrometrijsku analizu, Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je Nosip miš stupio u interakciju sa kompleksom proteinske fosfataze-2A (PP2A) koji sadrži katalitske podjedinice Pp2aca (PPP2CA) i Pp2acb (PPP2CB), podjedinicu skele Pr65-alfa (PPP2R1A) i regulatornu podjedinicu Pr55-alfa (PPP2R2B). Eksperimenti s povlačenjem proteina potvrdili su da je Nosip taložio holoenzim PP2A. Analiza ubikvitinacije in vitro pokazala je da je Nosip djelovao kao E3 ubikvitin-ligaza u monoubikvitinaciji katalitske podjedinice PP2A. Monoubikvitinacija nije uzrokovala proteasomsku degradaciju PP2A, ali izgleda da je smanjila aktivnost PP2A, putem nerazgradivog mehanizma.
Životinjski model[uredi | uredi izvor]
Koristeći carski rez, Hoffmeister et al. (2014) dobili su mišje embrione Day-18,5 Nosip –/– u mendelovskom omjeru, ali svi su umrli nedugo nakon rođenja, sa znakovima respiratornog distresa i cijanoza, vjerovatno zbog poteškoća s disanjem uzrokovanih ozbiljnim kraniofacijalnim malformacijama. Malformacije u miševa Nosip –/– kretale su se od očnog hipotelorizma, uske njuške, bočnog rascjepa usne i rascjepa sekundarnog nepca, do ciklopije i prisustva proboscisa ili pojedinačne izbočine nalik glavi bez likova lica. Analiza morfologije prednjeg mozga kod miševa Nosip –/– pokazala je karakteristična obilježja holoprosencefalije. Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je nedostatak Nosipa u tkivima Nosip –/– - nepca i lica, ali ne i u neoštećenom tkivu Nosip –/– pluća, povezan s povećanom aktivnošću PP2A.[8][9]
Reference[uredi | uredi izvor]
- ^ a b c GRCh38: Ensembl release 89: ENSG00000142546 - Ensembl, maj 2017
- ^ a b c GRCm38: Ensembl release 89: ENSMUSG00000003421 - Ensembl, maj 2017
- ^ "Human PubMed Reference:". National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.
- ^ "Mouse PubMed Reference:". National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.
- ^ Dedio J, Konig P, Wohlfart P, Schroeder C, Kummer W, Muller-Esterl W (Jan 2001). "NOSIP, a novel modulator of endothelial nitric oxide synthase activity". FASEB J. 15 (1): 79–89. doi:10.1096/fj.00-0078com. PMID 11149895. S2CID 34485514.
- ^ Lai CH, Chou CY, Ch'ang LY, Liu CS, Lin W (Aug 2000). "Identification of novel human genes evolutionarily conserved in Caenorhabditis elegans by comparative proteomics". Genome Res. 10 (5): 703–13. doi:10.1101/gr.10.5.703. PMC 310876. PMID 10810093.
- ^ "Entrez Gene: NOSIP nitric oxide synthase interacting protein".
- ^ Dedio, J., Konig, P., Wohlfart, P., Schroeder, C., Kummer, W., Muller-Esterl, W. NOSIP, a novel modulator of endothelial nitric oxide synthase activity. FASEB J. 15: 79-89, 2001. [PubMed]: 11149895
- ^ Hoffmeister, M., Prelle, C., Kuchler, P., Kovacevic, I., Moser, M., Muller-Esterl, W., Oess, S. The ubiquitin E3 ligase NOSIP modulates protein phosphatase 2A activity in craniofacial development. PLoS One 9: e116150, 2014. Note: Electronic Article. [PubMed]: 25546391
Dopunska literatura[uredi | uredi izvor]
- Schleicher M, Brundin F, Gross S, et al. (2005). "Cell cycle-regulated inactivation of endothelial NO synthase through NOSIP-dependent targeting to the cytoskeleton". Mol. Cell. Biol. 25 (18): 8251–8. doi:10.1128/MCB.25.18.8251-8258.2005. PMC 1234313. PMID 16135813.
- Andersen JS, Lam YW, Leung AK, et al. (2005). "Nucleolar proteome dynamics". Nature. 433 (7021): 77–83. doi:10.1038/nature03207. PMID 15635413. S2CID 4344740.
- Dreyer J, Schleicher M, Tappe A, et al. (2005). "Nitric oxide synthase (NOS)-interacting protein interacts with neuronal NOS and regulates its distribution and activity". J. Neurosci. 24 (46): 10454–65. doi:10.1523/JNEUROSCI.2265-04.2004. PMC 6730309. PMID 15548660.
- Gerhard DS, Wagner L, Feingold EA, et al. (2004). "The status, quality, and expansion of the NIH full-length cDNA project: the Mammalian Gene Collection (MGC)". Genome Res. 14 (10B): 2121–7. doi:10.1101/gr.2596504. PMC 528928. PMID 15489334.
- Ota T, Suzuki Y, Nishikawa T, et al. (2004). "Complete sequencing and characterization of 21,243 full-length human cDNAs". Nat. Genet. 36 (1): 40–5. doi:10.1038/ng1285. PMID 14702039.
- Strausberg RL, Feingold EA, Grouse LH, et al. (2003). "Generation and initial analysis of more than 15,000 full-length human and mouse cDNA sequences". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26): 16899–903. doi:10.1073/pnas.242603899. PMC 139241. PMID 12477932.